【出 处】： 补体受体1 克隆 真核表达 补体活化 乳酸脱氢酶

【作 者】： 杨永涛 [1] ; 田衍平 [2] ; 何莉 [1] ; 汪正清 [1]

【摘 要】构建包含人重组双功能域人补体受体Ⅰ与绿色荧光蛋白（GFP）的重组质粒,观察融合蛋白在非洲绿猴肾细胞（Vero）内表达并检测其抑制补体活化的能力。PCR方法扩增出重组双功能域CR1分子,限制性内切酶XhoⅠ和SalⅠ将重组分子连入真核表达载体pEGFP-N2中,构建出重组质粒pEGFP-N2/CR1-2D,脂质体转染Vero细胞中。新霉素G418筛选出稳定表达细胞克隆,荧光显微镜下观察绿色荧光融合蛋白在细胞内的表达。用Vero细胞和免疫小鼠获得的抗Vero细胞多克隆抗体激活补体后,通过检测乳酸脱氢酶的释放来分析重组蛋白抑制补体活化的功能。结果显示pEGFP-N2/CR1-2D质粒经酶切及测序分析证实载体构建正确。转染细胞后,荧光显微镜下观察到重组质粒pEGFP-N2/CR1-2D在Vero细胞中能够大量表达,G418筛选出了稳定表达细胞克隆,乳酸脱氢酶活性检测显示,与对照组相比CR1-2D能够显著的抑制补体的活化（P〈0.05）,初步证实了其能够抑制补体的活化。