【出 处】： 单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM) 融合蛋白 共刺激分子 T细胞

【作 者】： 黄子逸 [1,2] ; 朱耿超 [2,3] ; 王雪峰 [2,3] ; 张学光 [1,2,3]

【摘 要】为建立CHO／HVEM—Fc基因转染细胞株，使之能稳定分泌HVEM—Fc融合蛋白，采用常规PCR法分别从本单位已构建的重组载体pGEZ-Term／B7-H1Fc和plRES2-EGFPjHVEM上扩增人IgGl（Fc）恒定区和人HVEM胞外段编码基因，XhoI和BarnH1双酶切人IgGl（Fc）恒定区及真核表达载体pIRES2-EGFP，将两种酶切的目的产物连接为plRES2-EGFP／Fc，同时将获得的人HVEM胞外段基因片段经XhoI和NheI酶切后插入上述pIRES2-EGFP／Fc构建成pIRES2-EGFP／HVEM—Fc重组载体，通过脂质体转染仓鼠卵巢癌CHO细胞，培养基中添加0418长期筛选并将分泌目的蛋白的基因转染细胞株亚克隆化。流式细胞术检测HVEM—Fc融合蛋白的表达，收集含融合蛋白的基因转染细胞培养上清，ProteinG亲和层析柱对其进行纯化，Westernblot定性分析。MTT检测HVEM—Fc融合蛋白体外对抗人CD3单抗联合基因转染细胞L929／LIGHT刺激的T淋巴细胞增殖的影响。结果表明，基因转染细胞CHO／HVEM—Fc分泌的HVEM—Fc融合蛋白能与L929／LIGHT细胞有效结合，纯化后的蛋白经Westernblot鉴定出现特异性清晰条带，并且HVEMFc融合蛋白对L929／LIGHT协同刺激的T细胞体外增殖具有抑制作用。